Description

간편하고 쉽게 최적의 first cDNA 합성이 가능한 Manual type의 제품

• • Simple step
• • Rapid reaction time : 반응시간 1시간 내외
• • Ready-to-use : 합성에 필요한 모든 시약이 함유
• • Efficacy : cDNA 합성을 위해 실험 조건이 최적화
• • High purity : RNase 및 DNase 오염이 없음

Power cDNA Synthesis Kit는 total RNA 또는 mRNA template로부터 first-strand cDNA를 합성하는데 이용되는 제품으로,
역전사 효소(Reversetranscriptase), RNase inhibitor 등 cDNA 합성에 필요한 모든 구성 물질들이 포함되어 있습니다. Central Dogma 상에서 생명체가 갖고 있는 DNA로부터 단백질로의 발현은 생명현상의 이해에 있어 매우 중요한 요소입니다. 과거 이러한 발현 연구를 단백질 상에서 진행하였다면 오늘날은 단백질이 발현되기 위한 전사체인 mRNA에 대한 연구가 보다 활발하게 이루어지고 있습니다. 이는 단백질 분석에 비해 발현 유전자의 분석이 보다 정확하고 용이할 뿐만 아니라 매우 민감하게
수행할 수 있기 때문에 직접적인 방법보다 간접적인 방법인 RNA 연구가 시약, 시간 등의 비용 절약의 장점과 함께 선호되고 있습니다.
이를 가능하게 한 것은 Retroviruses(레트로바이러스)로부터 유래한 역전사 효소(reverse transcriptase)의 발견과 상용화에 기인한 것으로 이들 역전사 효소는 RNA 의존성 DNA 중합 효소로, RNA에 상보적인 DNA를 만들 수 있습니다. 이러한 역전사 효소에는 ribonuclease H 활성이 있어, 역전사 반응이 종료된 후 생긴
RNA-cDNA hybrid 상태에서 RNA만을 분해하여 결국 최종 단백질을 합성하기 전 단계인 cDNA만 남게 합니다. template로 하여 first-strand cDNA를 합성하는
역전사 반응에서는 무엇보다도 RNA template의 순도와 양이 반응의 효율성을 결정합니다. 따라서 RNA 시료의 준비 시 RNase 등이 혼입되지 않도록 주의해야 하며, protein, poly-anions(e.g.,heparin), salts, EDTA, ethanol, phenol 및 기타 용매들은 역전사 효소가 반응하는 데 영향을 줄 수 있으므로 이들 또한 혼입되지 않도록
주의해야 합니다.

Power cDNA Synthesis Kit는 고효율의 AMV 역전사 효소를 사용하기 때문에 full-length의 cDNA를 얻는데 효율적이며 최적의 first cDNA 합성 조건으로 개발된
제품이기 때문에, 발현량이 적은(low copy) 유전자의 발현을 확인코자 할 때 유용합니다. 또한, 매우 간편한 단계로 되어있어, 누구나가 쉽게 최고의 cDNA를 합성할 수 있음은 물론, PCR 수행 시 최적의 결과를 보장합니다.

Applications

• 01Standard RT
• 02Real-time PCR
• 03Microarray analysis
• 04RNA sequencing
• 05cDNA library

Kit Contents

Technical Data

Power cDNA Synthesis Kit는 Oligo dT(15) Primer와 Random Primer를 모두 제공해 드리고 있어 필요에 따라 자유롭게 선택할 수 있습니다.
상기 결과는 Oligo dT15 Primer와 Random Primer를 사용하여 사용되는 primer 종류에 따른 민감도를 확인한 것으로, 각각 first strand cDNA를 합성한 후 각각의 cDNA mixture를 희석하여 희석된 cDNA로 PCR 반응을 통하여 GAPDH 유전자의 발현을 비교한 결과 동등한 cDNA 합성 효율을 확인할 수 있었습니다.

Lane M, 100 DNA Marker Solution ; lane N, no template control; lane 1~7: template RNA 3-0 ~3-6

Viral Gene-spin™ Viral DNA/RNA Extraction Kit(Cat. No. 17151) 및 easy-BLUE™ Total RNA Extraction Kit(Cat. No. 17061)를
사용하여 virus와 세포로부터 total RNA를 추출한 후, Power cDNA Synthesis Kit를 이용하여 각각의 first strand cDNA를 합성하고 이를 PCR 반응한 결과 작은 size의 template (120 bp)부터 큰 size의 template(3 Kb)까지 모두 역전사 반응이 가능함을 확인하였습니다.

Lane M1, 100bp Ladder DNA marker; lane M2, 1kb Ladder DNA Marker; lane 1, Newcastle Disease Virus HN(120 bp); lane 2, Infectious Bursal
Disease Virus VP2(450 bp); lane 3, Bfl-1(570 bp),Bcl-2 family; lane 4, Human β-Action(890 bp); lane 5, hnRNP(900 bp), alternative splicing factor; lane 6, Bcl-2(3kb), Bcl-2 family