Description

Gene specific primer를 사용하여 cDNA를 합성과 PCR 반응을 한 번(ONE-STEP RT-PCR)에 수행할 수 있는 Master mix type의 RT-PCR PreMix Kit

• • One-step으로 RT-PCR 가능
• • Ready to Use
     - RT-PCR 반응에 필요한 모든 시약이 tube 하나에 용액상태로 포함
     - 사용자의 RNA, gene specific primer 및 DW만 첨가하면 되므로 사용이 매우 용이 함
• •민감한 cDNA 합성 및 높은 특이도의 PCR 증폭이 가능함
• •Master mix type으로 reaction volume을 사용자가 조절할 수 있음
• •Hot-start 기능의 Taq DNA Polymerase을 포함하여 높은 특이성 및 정확성을 보임

ONE-STEP RT-PCR PreMix Kit는 gene specific primer를 사용하여 cDNA를 합성과 PCR 반응을 한 번에 수행할 수 있는 master mix type의 ONE-STEP
RT-PCR PreMix Kit입니다. 일반적인 RT-PCR 방법은 oligo dT 및 random primer와 역전사효소를 이용한 cDNA 합성 과정과 DNA 중합 효소를 이용한 PCR
과정으로 구분되는 2-step의 순차적 반응으로 진행합니다. 하지만 이러한 방법은 유전자의 발현 연구에는 적합하나 다소 번거로우며, 복잡한 과정에서 빚어지는
cross contamination등의 단점이 있습니다. 특히 특정 유전자의 존재 유무의 확인 및 발현 유전자에 대한 정량/정성연구에는 Gene specific primer (GSP)를 사용하는 방법이 바람직하며, 실험 과정을 간소화 함으로서 반응 상의 오류를 최소화하는 것이 중요합니다.

ONE-STEP RT-PCR PreMix Kit는 total RNA 또는 mRNA template로부터 first-strand cDNA의 합성과 PCR 반응을 검출하고자 하는 GSP를 사용하여 하나의 tube 내에서 연속적으로 수행할 수 있도록 역전사효소와 DNA 중합 효소 및 각각의 반응에 필요한 모든 구성물질을 하나의 혼합용액으로 제품을 구성하였습니다.
ONE-STEP RT-PCR PreMix Kit의 OptiScript™RT System은 1 pg부터 2 mg의 template RNA로부터 정확하고 높은 효율의 역전사 반응이 이루어지며,
최적의 first cDNA 합성과 높은 특이도의 PCR이 이루어지도록 최적화된 제품으로서 발현량이 적은(low copy) 유전자의 발현을 확인코자 할 때 유용한 제품이며
냉동에서 동결되지 않도록 제작되어 있어 냉동조건 하에서 1년 이상 안정성이 최초의 활성 그대로 유지됩니다.

Applications

• 01RNA qualification study
• 02RNA expression study
• 03Specific RNA detection
• 04Virus research
• 05Molecular diagnostic study
• 06 Real-time RT-PCR, etc.

Kit Contents

[ 참고. ONE-STEP RT-PCR PreMix Kit ]

Component in 20 ul reaction

• •OptiScript™ RT System
• •i-StarTaq™ DNA Polymerase
• • RT-PCR Buffer(10x)
• •dNTP Mixture
• •Stabilizer

Technical Data

108.0EID50/0.1 ml의 요막강액을 십진희석 후 Viral Gene-spin™ Viral DNA/RNA Extraction Kit(Cat. No.17151)로 RNA를 추출한 후
ONE-STEP RT-PCR PreMix Kit를 사용하여 first strand cDNA 합성 및 PCR 반응을 진행하였습니다.
결과에서 볼 수 있듯이 높은 효율과 특이성을 가지고 있기 때문에 각종 질병의 검출에 사용 할 수 있는 것을 알 수 있습니다.

Lane M, 100bp Ladder DNA Marker; lane 1, 10^-2 희석; lane 2, 10^-3 희석; lane 3, 10^-4 희석; lane 4, 10^-5 희석; lane 5, 10^-6 희석; lane 6, 10^-7 희석; 
lane 7, 10^-8 희석; lane 8 : 10^-9 희석

easy-BLUE™ Total RNA Extraction Kit(Cat. No. 17061)을 사용하여 인체 암세포(human cancer cell lines(SNU 5))로부터 total RNA를
분리한 후, AMV Reverse Transcriptase 및 Optiscript™ RT System을 사용하여 각각 first strand of cDNA를 합성하였습니다.
만들어진 cDNA 혼합액을 적정농도 희석 한후, β-Actin(400bp) 유전자의 발현 정도를 비교하였습니다. 상기 결과에서 볼 수 있듯이, Optiscript™ RT System이 AMV RTase에 비해 민감도가 좋은 것을 확인할 수 있었습니다.
따라서, Optiscript™ RT System 및 i-StarTaq™DNA Polymerase를 사용하고 있는 ONE-STEP RT-PCR PreMix Kit는 높은 효율과 특이성을 가지고 있습니다. 즉, OptiScript™ RT System은 민감한 역전사 반응이 가능하며 i-StarTaq™ DNA Polymerase provides는 hot-start PCR
효소로서 높은 특이 도의 증폭이 가능합니다.