RT/RT-PCR

ONE-STEP RT-PCR PreMix Kit

Cat.No 용량 주문수량 판매가
25101 50 rxn. up down 165,000원
PRODUCT INFORMATION
Description

Gene specific primer를 사용하여 cDNA를 합성과 PCR 반응을 한 번(ONE-STEP RT-PCR)에 수행할 수 있는 Master mix type의 RT-PCR PreMix Kit

  • • One-step으로 RT-PCR 가능
  • • Ready to Use
       - RT-PCR 반응에 필요한 모든 시약이 tube 하나에 용액상태로 포함
       - 사용자의 RNA, gene specific primer 및 DW만 첨가하면 되므로 사용이 매우 용이 함
  • •민감한 cDNA 합성 및 높은 특이도의 PCR 증폭이 가능함
  • •Master mix type으로 reaction volume을 사용자가 조절할 수 있음
  • •Hot-start 기능의 Taq DNA Polymerase을 포함하여 높은 특이성 및 정확성을 보임

ONE-STEP RT-PCR PreMix Kit는 gene specific primer를 사용하여 cDNA를 합성과 PCR 반응을 한 번에 수행할 수 있는 master mix type의 ONE-STEP
RT-PCR PreMix Kit입니다. 일반적인 RT-PCR 방법은 oligo dT 및 random primer와 역전사효소를 이용한 cDNA 합성 과정과 DNA 중합 효소를 이용한 PCR
과정으로 구분되는 2-step의 순차적 반응으로 진행합니다. 하지만 이러한 방법은 유전자의 발현 연구에는 적합하나 다소 번거로우며, 복잡한 과정에서 빚어지는
cross contamination등의 단점이 있습니다. 특히 특정 유전자의 존재 유무의 확인 및 발현 유전자에 대한 정량/정성연구에는 Gene specific primer (GSP)를 사용하는 방법이 바람직하며, 실험 과정을 간소화 함으로서 반응 상의 오류를 최소화하는 것이 중요합니다.

ONE-STEP RT-PCR PreMix Kit는 total RNA 또는 mRNA template로부터 first-strand cDNA의 합성과 PCR 반응을 검출하고자 하는 GSP를 사용하여 하나의 tube 내에서 연속적으로 수행할 수 있도록 역전사효소와 DNA 중합 효소 및 각각의 반응에 필요한 모든 구성물질을 하나의 혼합용액으로 제품을 구성하였습니다.
ONE-STEP RT-PCR PreMix Kit의 OptiScript™RT System은 1 pg부터 2 mg의 template RNA로부터 정확하고 높은 효율의 역전사 반응이 이루어지며,
최적의 first cDNA 합성과 높은 특이도의 PCR이 이루어지도록 최적화된 제품으로서 발현량이 적은(low copy) 유전자의 발현을 확인코자 할 때 유용한 제품이며
냉동에서 동결되지 않도록 제작되어 있어 냉동조건 하에서 1년 이상 안정성이 최초의 활성 그대로 유지됩니다.

Applications
  • 01RNA qualification study
  • 02RNA expression study
  • 03Specific RNA detection
  • 04Virus research
  • 05Molecular diagnostic study
  • 06 Real-time RT-PCR, etc.
Kit Contents
Content 25101(50 rxn)
ONE-STEP RT-PCR PreMix Kit 200 ul x 2 tubes
Manual 1 ea

[ 참고. ONE-STEP RT-PCR PreMix Kit ]

Component in 20 ul reaction

  • •OptiScript™ RT System
  • •i-StarTaq™ DNA Polymerase
  • • RT-PCR Buffer(10x)
  • •dNTP Mixture
  • •Stabilizer
Technical Data

바이러스 검사를 통한 민감도 및 특이도 관찰


 

108.0EID50/0.1 ml의 요막강액을 십진희석 후 Viral Gene-spin™ Viral DNA/RNA Extraction Kit(Cat. No.17151)로 RNA를 추출한 후
ONE-STEP RT-PCR PreMix Kit를 사용하여 first strand cDNA 합성 및 PCR 반응을 진행하였습니다.
결과에서 볼 수 있듯이 높은 효율과 특이성을 가지고 있기 때문에 각종 질병의 검출에 사용 할 수 있는 것을 알 수 있습니다.

Lane M, 100bp Ladder DNA Marker; lane 1, 10-2 희석; lane 2, 10-3 희석; lane 3, 10-4 희석; lane 4, 10-5 희석; lane 5, 10-6 희석; lane 6, 10-7 희석; 
lane 7, 10-8 희석; lane 8 : 10-9 희석

민감도 및 특이도 관찰


 

easy-BLUE™ Total RNA Extraction Kit(Cat. No. 17061)을 사용하여 인체 암세포(human cancer cell lines(SNU 5))로부터 total RNA를
분리한 후, AMV Reverse Transcriptase 및 Optiscript™ RT System을 사용하여 각각 first strand of cDNA를 합성하였습니다.
만들어진 cDNA 혼합액을 적정농도 희석 한후, β-Actin(400bp) 유전자의 발현 정도를 비교하였습니다. 상기 결과에서 볼 수 있듯이, Optiscript™ RT System이 AMV RTase에 비해 민감도가 좋은 것을 확인할 수 있었습니다.
따라서, Optiscript™ RT System 및 i-StarTaq™DNA Polymerase를 사용하고 있는 ONE-STEP RT-PCR PreMix Kit는 높은 효율과 특이성을 가지고 있습니다. 즉, OptiScript™ RT System은 민감한 역전사 반응이 가능하며 i-StarTaq™ DNA Polymerase provides는 hot-start PCR
효소로서 높은 특이 도의 증폭이 가능합니다.

TroubleShooting Guide
QMaxime 제품을 보면 loading dye가 포함되어 있는데, 이 제품에도 포함되어 있나요?
AONE-STEP RT-PCR PreMix는 고형화되어 나오지 않고 Master mix 형태인 액화 상태로 제공이 됩니다.
따라서 loading dye는 포함되어 있지 않습니다.
QReaction buffer 제조시 RNase inhibitor가 들어가는 contents에는 포함되어 있지 않습니다. 별도 구매하여야 하나요?
A본 제품은 RNase inhibitor 미포함 제품입니다. RNase inhibitor 별도구매를 하셔야 합니다.
당사의 RNase inhibitor는 2000U에 110,000원에 판매되고 있습니다.
Q매뉴얼을 보고 실험을 하려는데 template의 양이 나와 있지 않습니다. 얼마를 사용하면 되나요?
ATotal RNA의 경우 500ng 이하를 사용하시고 poly (A) RNA 경우 0.05-0.1ug을 사용하시면 됩니다.
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상품명 Cat.No 용량 가격  
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