Description

높은 정확성을 요하는 gene cloning에 꼭 필요힌 Proofreading 기능을 가지며 낮은 에러율을 보이는 고순도의 pfu DNA Polymerase가 포함되어 있는 2x PCR Master mix type의 제품

• • Ready-to-use
     - 반응에 필요한 모든 시약이 tube 하나에 용액상태로 포함
     - Template, primer 및 D.W만 첨가하면 바로 PCR 수행
• • PCR reaction volume 조절이 가능
• • 높은 정확성
     - Proof-reading 활성이 있어 장편의 DNA template 증폭 가능
     - 유전자 cloning 및 발현과 같은 정확성을 요구하는 실험에 최적
• • 낮은 error rate
     - 3’→5’ exonuclease 활성이 있는 대표적인 내열성의 proof-reading 효소로서 1x10^-6의 error rate를 가짐
• • Blunt-end Cloning 가능

2x PCR Master mix Solution(i-pfu)는 i-pfu DNA Polymerase를 포함하여 PCR 반응에 필요한 모든 구성요소들을 하나의 tube안에 2x Master mix type으로 하여 간단하면서도 최상의 결과를 얻을 수 있도록 고안된 제품입니다. 본 제품은 template DNA, Primer set 그리고 D.W만 첨가하여 PCR을 할 수 있고, Gel loading buffer가 들어가 있어 다른 어떠한 처리 없이 gel loading을 할 수 있습니다. 본 제품에 사용된 i-pfu DNA Polymerase는 3’→5’ exonuclease 활성이 있는 대표적인 내열성의 Proof-reading 효소로서, 높은 fidelity를 가지고 있으며 1x10^-6(13,000 base pair당 한 개의 error rate)의 error rate를 나타냅니다.

pfu DNA Polymerase가 가지는 proof-reading 활성은, DNA Polymerase가 중합반응을 진행하는 중에 mismatched nucleotide가 끼어든 경우 이를 제거하고
상보적인 nucleotide로 교정할 수 있다는 것입니다. 이러한 활성은 Taq DNA Polymerase보다 더 정확한 염기서열의 PCR 산물을 얻을 수 있도록 하기도 하지만, Taq DNA Polymerase에 비하여 더 긴 DNA template를 증폭할 수 있도록 해줍니다. DNA 합성과정 중 DNA Polymerase가 template로부터 떨어져 나오게 되는 가장 큰 원인이 mismatched nucleotide가 중합반응을 방해하기 때문인데, Pfu DNA Polymerase 경우 이를 제거할 수 있기 때문에 중합반응을 계속할 수 있게 되며, 일반적인 Taq으로 증폭이 어려운 긴 size의 PCR(up to~30 kb)에 적합한 효소로 일반 Taq DNA Polymerase에 비해 높은 fidelity와 proof reading 기능을 가지고 있습니다. 그 결과 Taq DNA Polymerase보다 더 긴 DNA fragment(최대 30kb)를 증폭할 수 있는 것입니다.

이런 특성 때문에 Pfu DNA Polymerase가 중합효율이 떨어져 중합에 더 많은 시간을 필요로 함에도 불구하고 유전자 cloning 및 발현과 같이 정확성이 요구되는 실험에 널리 이용되고 있습니다. 2x PCR Master mix Solution(i-pfu)는 위와 같은 i-pfu DNA Polymerase를 사용하여 높은 fidelity를 가지고 있으며 1x10-6(13,000 base pair당 한 개의 error rate)의 낮은 error rate를 특징으로 하고 있습니다. 이와 더불어 재현성이 높고, 여러 sample에 대해 빠르고 간단하게 실험하실 수 있는 제품입니다.

Applications

• 01General PCR
• 02염기서열 분석을 위한 template 증폭
• 03Blunt Cloning, etc.

Kit Contents

Technical Data

2x PCR Master mix Solution(i-pfu)과 타사 동일 기능의 제품을 이용해 다양한 종류의 DNA에 대한 template 농도별 PCR 효율을 전기영동으로 확인하였습니다. E. coli 유래 DNA를 주형으로 4.5 Kb를 증폭하였으며, lambda DNA를 주형으로 1 Kb 단편을 증폭한 결과, 타사 동일 기능의 제품 대비 우수한 증폭 효율을 확인할 수 있습니다.

A, 2x PCR Master mix Solution(i-pfu); B, Supplier A; C, Supplier B
Lane M, 100 bp DNA Marker, 1 Kb DNA Marker; lane N, Negative control