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PCR

i-pfu DNA Polymerase

	Cat.No	용량	주문수량	판매가
	25181	250 unit	up down	175,000원

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제품정보
Trouble Shooting
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MSDS

PRODUCT INFORMATION

Description

높은 정확성을 요하는 gene cloning에 꼭 필요한 Proof-reading 기능을 가지며 낮은 에러율을 보이는 고순도의 pfu DNA Polymerase의
PCR core Kit

• 높은 정확성
- Proof-reading 활성이 있어 장편의 DNA template 증폭 가능
- 유전자 cloning 및 발현과 같은 정확성을 요구하는 실험에 최적
• 낮은 error rate
- 3’→5’ exonuclease 활성이 있는 대표적인 내열성의 proof-reading 효소로서 1x10^-6의 error rate를 가짐
• Blunt-end Cloning 가능

i-pfu DNA Polymerase는 3’→5’ exonuclease 활성이 있는 대표적인 내열성의 Proof-reading 효소로서, 높은 fidelity를 가지고 있으며 1x10^-6(13,000 base pair당 한 개의 error rate)의 error rate를 보장하는 제품입니다. pfu DNA Polymerase가 가지는 proof-reading 활성은, DNA Polymerase가 중합반응을 진행하는 중에 mismatched(상보적이지 않은) nucleotide가 끼어든 경우 이를 제거하고 상보적인 nucleotide로 교정할 수 있다는 것입니다. 이러한 활성은 Taq DNA Polymerase
보다 더 정확한 염기서열의 PCR 산물을 얻을 수 있도록 하기도 하지만, Taq DNA Polymerase에 비하여 더 긴 DNA template를 증폭할 수 있도록 해줍니다.

DNA 합성과정 중 DNA Polymerase가 template로부터 떨어져 나오게 되는 가장 큰 원인이 mismatched nucleotide가 중합반응을 방해하기 때문인데, Pfu DNA Polymerase의 경우 이를 제거할 수 있기 때문에 중합반응을 계속할 수 있게 되며, 일반적인 Taq으로는 증폭이 어려운 긴 size 의 PCR(up to ~ 30 kb)에 적합한 효소로 일반 Taq DNA Polymerase에 비해 높은 fidelity와 proof reading 기능을 가지고 있습니다.

그 결과 Taq DNA Polymerase보다 더 긴 DNA fragment (최대 30kb)를 증폭할 수 있는 것입니다. 이런 특성 때문에 Pfu DNA Polymerase가 중합효율이 떨어져
중합에 더 많은 시간을 필요로 함에도 불구하고 유전자 cloning 및 발현과 같이 정확성이 요구되는 실험에는 널리 이용되고 있습니다. 이러한 i-pfu DNA Polymerase는 Taq DNA Polymerase와는 달리 blunt-end의 증폭산물을 만듭니다. 따라서 증폭산물을 클로닝하기 위해서는 blunt-end를 갖는 vector에 클로닝 할 수 있으며
T vector 클로닝 하기 위해서는 염기 A를 부가적으로 붙여 주어야 합니다.

Applications

01General PCR
02염기서열 분석을 위한 template 증폭
03Blunt Cloning, etc.

Kit Contents

Content	250 Units
i-pfu DNA Polymerase(2.5U/ul)	250 units x 1 tube
10× PCR Buffer(w/15 mM Mg2+)	1 ml x 1 tube
10× Mg2+ free PCR Buffer	1 ml x 1 tube
10 mM dNTPs (2.5 mM/each)	500 ul x 1 tube
25 mM Mg2+	1 ml x 1 tube
Manual	1 ea

참고. 10x i-pfu PCR Buffer

Technical Data

민감도 비교 test 결과(타사비교)

i-pfu DNA Polymeras와 Company A, B 사의 동일 기능의 제품을 이용하여 민감도를 비교하 기 위하여 1 Kb와 4.5 Kb fragment primer로 template 농도 별 희석하여 증폭한 결과입니다. i-pfu DNA Polymeras가 타사 동일 기능의 제품에 비하여 좀 더 낮은 template 농도에서도 뛰어난 민감도를 보여주고 있음을 볼 수 있습니다.

[ Panel A ] 1 Kb amplification(λDNA)
Lane M, 1 Kb DNA Ladder; lane 1, 200 pg λDNA; lane 2, 100 pg λDNA; lane 3, 50 pg λDNA; lane 4, 25 pg λDNA; lane 5, 12.5 pg λDNA; lane 6, 6.25 pg λDNA; lane 7, 3.125 pg λDNA; lane N, negative control

[ Panel B ] 4.5 Kb amplification(TopoXL/5F)
Lane M, 1 Kb DNA Ladder; lane 1, 50 ng DNA; lane 2, 10 ng DNA; lane 3, 2 ng DNA; lane 4, 400 fg DNA; lane 5, 80 fg DNA; lane 6, 16 fg DNA; lane 7, 3.2 fg DNA; lane N, negative control

TroubleShooting Guide

Q실험을 하기 위해 메뉴얼을 보니 reaction volume이 50ul일 때 실험법만 나와 있습니다. 20ul로 volume을 변경하려는데 taq을 얼마나 넣으면 되나요?: APCR reaction volume이 50ul에서 20ul로 줄이더라도 같은 양의 Taq을 넣어주면 됩니다. template, primer등 동일한 양을 넣어 실험하면 됩니다. 단지 달라지는 것은 10X PCR buffer를 5ul 넣지 마시고 2ul 로 줄여서 사용하시기 바랍니다.

Q현재 full genomic seqeuncing을 수행중인데 PCR시 mutation이 있으면 반응진행이 안됩니다. fidelity가 높은 제품이 있나요?: A당사의 i-pfu의 경우 error rate은 1X10^-6이며, 최대 10kb까지 증폭이 가능합니다. 더 높은 기능이 함유된 제품을 원하신다면, error rate이 1.8X10^-8이고 20kb까지 합성 가능한 i-StarMAXII™ 제품을 추천 드립니다.

QHIV의 mutagenesis 연구 중입니다. point mutation 실험하려고 하는데, kit화된 제품은 가격이 비싸고 enzyme만 구매하고 싶은데 적합한 제품이 있습니까?: Ai-pfu™ DNA polymerase를 추천드립니다. i-pfu DNA polymerase는 proof-reading 활성을 가지고 있어 PCR 반응 중에 mutation
발생 비율을 낮추어 줍니다.