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PCR

i-MAX™Ⅱ DNA Polymerase

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	25261	250 unit	up down	130,000원

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제품정보
Trouble Shooting
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MSDS

PRODUCT INFORMATION

Description

Proofreading 기능을 가지고 있어 작은 size DNA부터 20 Kb 이상의 DNA까지 증폭이 가능한 높은 감도, 정확성 및 낮은 에러율을 가진
PCR core Kit

• 높은 정확성 및 낮은 에러율 가짐
- Proof-reading 활성이 있어 장편의 DNA template 증폭 가능
- 긴 template DNA 및 짧은 template DNA의 증폭에 대한 높은 증폭효율 보장
• 클로닝된 DNA,인체 genomic DNA 뿐만 아니라 GC-rich 또는 looped sequences등의 증폭이 어려운 template에 이르기까지 다양한
DNA에 적용 가능

i-MAX™ II DNA Polymerase는 Taq DNA Polymerase와 Pfu DNA Polymerase의 장점을 취하여 각 효소의 단점을 극복하고 새로운 기능을 얻은 효소로서, Proofreading 기능을 가지고 있어 작은 size DNA(4~5 Kb 이하)부터 20 Kb 이상의 DNA까지 증폭이 가능한 제품입니다. Taq DNA Polymerase는 template가
5 Kb를 넘는 경우 증폭효율이 현저히 떨어지며 주형의 종류에 따라 다르기는 하지만 10 Kb나 그 이상의 DNA 주형은 증폭하기 어렵습니다.
이런 현상은 Taq DNA Polymerase에 proof-reading 활성이 없기 때문으로, DNA 합성과정에서 mismatched nucleotide가 삽입되는 경우 template에서 떨어져서 중합에 실패하기 때문입니다.

Taq DNA Polymerase의 이러한 결함은 교정기능이 있는 내열성 DNA polymerase를 함께 사용하며 극복될 수 있습니다. 이러한 교정 기능은 DNA Polymerase가
중합반응을 진행하는 중에 mismatched(상보적이지 않은) nucleotide가 끼어든 경우 이를 제거하고 상보적인 nucleotide로 교정할 수 있다는 것입니다. 이러한 활성은 Taq DNA Polymerase보다 더 정확한 염기서열의 PCR 산물을 얻을 수 있도록 하기도 하지만, Taq DNA Polymerase에 비하여 더 긴 DNA template를 증폭할 수
있도록 해줍니다.

이러한 교정기능이 있는 내열성 DNA Polymerase 중 대표적인 효소가 Pfu DNA Polymerase로 일반적인 Taq으로는 증폭이 어려운 긴 size의 PCR(up to ~ 30 kb)에 적합한 효소로 일반 Taq DNA Polymerase에 비해 높은 fidelity와 proof reading 기능을 가지고 있습니다. 하지만 Pfu DNA Polymerase는 중합효율이 떨어져 DNA 중합에 더 많은 시간을 필요로 한다는 단점을 가지고 있습니다.
i-MAX™ II DNA Polymerase는 이와 같은 Taq DNA Polymerase와 Pfu DNA Polymerase의 장점을 취하여 하여 비해 작은 size (4~5Kb 이하) 뿐만 아니라 긴
size에서의 증폭률을 증가시켰음은 물론, 민감도 부분에서도 우수한 결과를 나타내는 제품입니다.

Applications

01General PCR
02Human genomic DNA와 같이 까다로운 template나 primer에 대한 PCR
03긴 DNA fragment의 증폭 : 20 Kb 까지 증폭
04TA Cloning & Blunt Cloning, etc.

Kit Contents

Content	250 Units
i-MAX™ II DNA Polymerase(5U/ul)	250 units x 1 tube
10× PCR Buffer(w/20 mM Mg2+)	1.5 ml x 1 tube
10× Mg2+ free PCR Buffer	1.5 ml x 1 tube
10 mM dNTPs (2.5 mM/each)	800 ul x 1 tube
25 mM Mg2+	1.5 ml x 1 tube
Manual	1 ea

참고. 10x i-MAX™ II PCR Buffer

Technical Data

Sensitivity 타사 비교

DNA 증폭에 있어서 민감도(sensitivity)를 측정하기 위해 타사 동일기능의 제품과 i-MAX™ II DNA Polymerase를 비교하였습니다. 결과에서
볼 수 있듯이, i-MAX™ II DNA Polymerase는 타사제품에 비해 약 100배~1,000배 정도 적은 양의 DNA도 효과적으로 증폭하고 있음을 보여주고 있습니다.

Lane M, 100 bp Ladder DNA Marker; lane 1, 25 ng gDNA; lane 2, 5 ng gDNA; lane 3, 1 ng gDNA; lane 4, 200 pg gDNA; lane 5, 40 pg gDNA; lane 6, 8 pg gDNA; lane 7, 1.6 pg gDNA; lane NC, negative control

Batch별 안정성 test 결과 관찰

i-MAX™ II DNA Polymerase의 제조 batch에 따른 Lamda DNA를 template로 하여 1 Kb size에 대한 민감도 활성을 통해 batch variation을 확인하였습니다. 각 증폭 유형별 batch 들의 동등한 활성을 확인 할 수 있습니다.

Lane M, 1 Kb DNA ladder; lane NC, Negative control; lane 1, 100 ng lamda DNA; lane 2, 50 ng lamda DNA; lane 3, 25 ng lamda DNA; lane 4, 12.5 ng lamda DNA; lane 5, 6.25 ng lamda DNA; lane 6, 3.125 ng lamda DNA; lane 7, 1.5625 ng lamda DNA

TroubleShooting Guide

Q식물에서 genomic DNA를 추출하여 TA cloning을 하기 위해 taq을 찾던 중 i-MAXII™가 이전결과와 유사한 PCR 패턴을 보여 사용하였으나 cloning이 잘 되지 않습니다.: A당사의 i-MAXII™의 경우 long PCR용으로 디자인된 제품이지만 TA cloning도 가능합니다. 그러나 작은 size의 products를 TA cloning
하실 경우, i-MAXII™ 보다는 TA-cloning에 적합하게 제작된 i-Taq™ 제품을 권장드립니다.

Qeasy-spin으로 RNA를 추출한 뒤, Maxime RT 제품으로 cDNA 합성하였습니다. i-MAXII™를 사용하여 PCR을 진행하였는데 PCR 효율이 좋지 않습니다.: A당사의 제품을 사용해 주셔서 감사합니다. cDNA를 합성한 후, PCR 진행시 template양이 많으면 오히려 PCR 저해요인이 될 수 있습니다.
그러므로 template양을 줄여서 실험을 진행하신다면 보다 좋은 결과를 얻으실 수 있습니다.

Q홈페이지에 i-MAXII™의 fidelity가 높다고 나와 있는데, i-pfu™와 비교하여 error rate는 어떻게 되나요?: Ai-MAXII™의 error rate 는 1.8X10-⁸입니다. i-pfu™의 경우 1X10-⁶입니다.