Description

Template 종류 및 반응조건에 관계없이 안정적이고 효율적인 DNA 증폭을 나타내는 고순도의 i-Taq™ PCR core Kit

• • 94 KDa의 thermostable DNA polymerase
• • 고순도의 Taq DNA Polymerase
     - PCR 오염원으로 작용할 수 있는 대장균 유래 단백질 및 DNA 제거
• • Template 종류 또는 반응조건에 관계없이 최상의 Polymerase 활성을 나타낼 수 있도록 Buffer 최적화
• • 재현성 높은 결과 획득
• • 클로닝 된 DNA에서 인체 genomic DNA에 이르기까지 다양한 DNA에 적용 가능

i-Taq™ DNA Polymerase는 Thermus aquaticus(strain YT1)의 polymerase gene을 cloning 하여 E.coli에 발현시킨 94 KDa의 thermostable DNA Polymerase로서 PCR 오염원으로 작용할 수 있는 E.coli 유래 단백질 및 DNA를 제거 하여 고순도로 정제되어 안정적이면서 효율적인 DNA 증폭이 가능한 제품입니다. Genomic DNA, cDNA 등으로부터 최대 5 Kb까지 증폭이 가능합니다. PCR(Polymerase Chain Reaction)은 특정 DNA 부위를 특이적으로 반복 합성하여 시험관내에서 원하는 DNA 분자를 증폭시키는 방법으로서, 아주 적은 양의 DNA를 이용하여 많은 양의 DNA로 합성이 가능하여 분자 분자생물학은 물론 기초생물학, 의학을 비롯한 생물학과 전체에 널리 퍼져 있으며, 현재 법의학 및 식품, 환경위생, 동식물 검사 등의 분야에서도 간편하고 신속한 방법으로 그 이용범위를 넓혀가고 있습니다.

중합효소 연쇄반응을 통하여 in vitro상에서 특정 부위의 DNA를 10⁵ ∼10⁸배까지 수 시간 내에 증폭시킬 수 있으며, 이렇게 증폭된 DNA를 원하는 여러 실험에 이용할 수 있고, 실험 결과를 토대로 여러 의학적인 연구에 응용할 수 있습니다. 이 실험법이 개발된 초창기에는 대장균의 DNA Polymerse를 사용하여 PCR을 수행하였기 때문에 denaturation 때마다 변성된 대장균의 DNA Polymerase를 보충해 주어야만 했습니다. 그러나 Thermus aquaticus로부터 분리된 내열성의 DNA Polymerase를 PCR에 사용하게 됨으로써 단계별 효소를 보충해주어야 하는 번거로운 일을 하지않아도 되었으며, 이를 계기로 PCR은 분자생물학에 없어서는 안될 실험법이 되었습니다.

PCR에는 일련의 세 개의 단계가 있고 30~40회 정도 반복됩니다. PCR의 첫 번째 단계는 DNA를 변성(Denaturation)시키는 것으로, 두 가닥의 DNA는 가열함으로써
분리시킵니다. 분리된 각각의 DNA는 주형(Template)으로서 역할을 하게 되며 변성 온도는 DNA 내에 있는 G+C의 양과 길이에 따라 달라집니다.
PCR의 두 번째 단계는 결합(Annealing)입니다. 이 단계에서는 Primer들이 주형 DNA에 결합을 하게 되며 결합(Annealing) 온도는 반응의 정확성을 결정하는 중요한 요소인데 만약 온도를 너무 높게 하면 Primer들이 주형 DNA에 너무 약하게 결합되어서 증폭된 DNA의 산물이 매우 적어지고, 온도를 너무 낮게 하면 Primer들이 비특이적으로 결합하기 때문에 원하지 않는 DNA가 증폭될 수 있습니다.
PCR의 세 번째 단계는 신장(Elongation)단계입니다. 이 단계에서 열에 강한 DNA 중합효소가 주형 DNA에서 새로운 DNA를 만들게 됩니다. i-Taq™ DNA Polymerase 고순도의 효소와 더불어 template 종류 또는 반응 조건에 관계 없이 최상의 Polymerase 활성을 나타낼 수 있도록 buffer 조성을 최적화 하여 재현성 높은 결과를 얻을 수 있는 제품입니다. 본 효소를 사용하여 증폭한 산물의 대부분은 3말단에 염기 A가 하나 더 추가 되어 있기 때문에 PCR 산물을 그대로 T-vector에 클로닝
할 수 있습니다. 또한 Klenow DNA Polymerase나 T4 DNA Polymerase 같은 DNA Polymerase로 말단을 채워 blunt end로 만들고 인산화를 통해 blunt-end vector에도 클로닝 할 수 있습니다.

Kit Contents

Technical Data

i-Taq™ DNA Polymerase 와  Company A, B 사의 동일 기능의 DNA polymerase를 이용하여 민감도 비교한 결과, 타사 제품 대비 동등 이상의 결과를 확인할 수 있습니다. 본 실험은 Bovine gDNA를 농도별로 희석하여 CSF primer로 증폭한 결과입니다.

Lane M, 100 bp DNA Marker; lane 1, 1 ng gDNA; lane 2, 100 pg gDNA; lane 3, 10 pg gDNA; lane 4, 1 pg gDNA; lane 5, 100 fg gDNA; lane N, Negative control

i-Taq™ DNA Polymerase의 제조 batch 별 민감도 활성을 확인 하였습니다. 순차적으로 희석된 SNU-1 cDNA 및 Lambda DNA로부터 GAPDH(575 bp) 및 1 Kb fragment를 증폭하여 민감도를 확인하였습니다. 총 20 ul 반응액에 1 unit의 i-Taq™ DNA Polymerase를 사용하여 증폭하였으며, 5 ul를 agarose gel에 전기 영동하여 확인한 결과입니다.

Lane M, 100 bp DNA Marker; 1 Kb DNA Marker; lane N, Negative control