Protein

Miracle-Star™ Western Blot Detection System

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16028 200 ㎖ up down 135,000원
PRODUCT INFORMATION
Description

강한 intensity, 빠른 Reaction, 높은 민감도의 Chemiluminescence Western Blot 제품

  • • 극미량 단백질(pg)도 효과적으로 detection이 가능함
  • • High Signal Intensity – 더욱 강력해진 화학 발광 반응
  • • Duration Time - 향상된 Duration time으로 반응 후 2시간 동안 안정적인 발광도 유지
  • • 높은 반응성 - 1~5분간의 incubation으로도 뛰어난 화학 발광 반응 얻을 수 있음
  • • 경제적 - 높은 반응성(with HRP)을 보유한 제품으로 2차 항체의 사용량 절감 가능

Miracle-Star™ Western Blot Detection System은 HRP 가 결합된 2차 항체를 이용한 Western Blot Detection에서 화학발광을 통해 목적 항원 (단백질)을
강한 발광도와 높은 민감도로 검출 할 수 있는 제품입니다.

Western Blot Detection은 목적 단백질의 발현 연구에 있어 보편화 된 필수적 연구 방법으로서 다음과 같은 과정을 통해 진행됩니다.
단백질 검출 과정 중, 2차 항체에 결합되어있는 AP(Alkaline phosphatase) 혹은 HRP (Horse radish peroxidase) 등이 당사 제품과 반응하여 화학 발광을 일으키며
2차 항체의 HRP는 Miracle-Star™ Western Blot Detection System의 Enhancer Solution 내에 포함되어 있는 Hydrogen peroxide를 분해시킵니다.
이때 유리되는 산소에 의해 Luminol이 산화되어 강한 청백발광을 일으키게 되고, 이러한 화학발광을 암실 내에서 X-ray Film에 감광시킨 후 인화 및 현상하게 되면
특정한 항체가 결합된 항원의 위치에서 밴드가 검출되고, 이를 통해 목적 단백질의 발현 여부를 확인할 수 있습니다.

Miracle-Star™ Western Blot Detection System은 화학 발광을 일으키는 Luminol을 포함한 Substrate Solution과 반응을 촉매하여 강한 발광을 촉진시키는 Enhancer Solution으로 구성되어 있으며 각각의 용액은 1 : 1의 비율로 혼합하여 사용합니다.

Miracle-Star™ Western Blot Detection System 의 단백질 검출 과정

Miracle-Star™ Western Blot Detection System 기존의 당사 보유 제품에 비해 반응 초기의 발광도를 향상시켰을 뿐만 아니라, Duration Time도 대폭 개선하여
극소량의 단백질을 보다 민감하고 선명하게 검출 할 수 있는 제품입니다. 또한 보관 기간중 Hydrogen peroxide의 환원을 효과적으로 제어하여 제품의 보존 안정성을
개선함으로써 강력한 초기 품질을 1년 이상 그대로 유지할 수 있는 제품입니다.

Applications
  • 01화학 발광을 이용한 Western Blotting
  • 02HRP가 결합된 avidin 을 사용할 경우 biotin-avidine-HRP를 사용한 각종 Blot (Southern, Northern) 등에 응용 가능
Kit Contents
Contents 16028
Substrate Solution 100ml × 1 ea
Enhancer Solution 100ml × 1 ea
Manual 1 ea
Technical Data

민감도

Western Blotting을 통해 Human actin 단백질의 검출을 진행하여 기존 당사 보유 제품과의 민감도를 관찰한 결과 초기의 반응의 민감도 및 Signal의 Intensity가 향상되었으며 반응 후 1시간이 지난 뒤에도 기존 제품 대비 높은 Signal을 확인 할 수 있었습니다.

* 2차 항체 사용량 : 1/10,000 diluted, 반응시간 : 1min, 감광시간 : 1min
lane 1; 250 pg of antigen, lane 2; 125 pg of antigen, lane 3; 62.5 pg of antigen, lane 4; 31.3 pg of antigen, lane 5; 15.6 pg of antigen, lane 6; 7.8 pg of antigen, lane 7; 3.9 pg of antigen, lane 8; 2.0 pg of antigen.

반응성

Luminol에 의한 화학발광 반응을 최적화하여 빠른 시간 내 높은 반응성을 보임을 확인하였습니다. 향상된 반응성에 의해 낮은 양의 항체를 사용해도 선명한 목적 단백질의 검출이 가능하므로 경제적인 Western Blot이 가능합니다. (최적 항체 사용량은 항원-항체 반응의 민감도 및 항체의 활성도에 따라 달라질 수 있으며 사용 전 Dot Blot 등을 통한 최적 사용량의 결정을 권합니다.)

* 반응시간 : 1min, 반응 후 정치시간 : 1시간 이후 감광, 감광시간 : 1min
Lane M; Western Protein Marker, lane 1; 250 pg of antigen, lane 2; 125 pg of antigen, lane 3; 62.5 pg of antigen, lane 4; 31.3 pg of antigen, lane 5; 15.6 pg of antigen, lane 6; 7.8 pg of antigen, lane 7; 3.9 pg of antigen, lane 8; 2.0 pg of antigen.

TroubleShooting Guide
Q Miracle-Star 초기 감도가 너무 강해서 band에 white spot이 형성됩니다. 이 현상을 감소시킬 수 있는 방법이 있나요?
A 감도가 강하다는 것은 반응하는 단백질의 양이 많거나 antibody의 민감도가 높아서 나타날 수 있으므로 우선 초기 loading 샘플 양을
줄여서 실험을 진행해 보시기 바랍니다. 또한 primary나 secondary antibody를 희석해서 사용하시고 exposure 시간을 줄이거나 antibody 결합 후 washing 시간 을 늘려주어 불필요한 antibody가 제거된다면 반응의 강도를 줄일 수 있습니다.
Q Back ground 현상이 나타나는 이유는 무엇입니까??
A Back ground 현상은 membrane에 solution 처리 후 잔여물이 많이 남게 되면, 여분의 antibody와 반응이 일어나면서 일어날 수 있습니다.
Secondary antibody양을 줄이시고 washing 시간을 늘려주시면 좋은 결과를 얻으실 수 있으실 겁니다. 또한 exposure 시간을 권장시간
1분 또는 30초 정도로 줄여서 테스트를 진행해 보시기 바랍니다.
Q 일반 X-ray film을 사용하다가 최근 LAS4000을 구입하면서 기계를 이용하여 detection 하려 하는데 같은 방법으로 사용하면 되나요?
A 당사의 Miracle-Star 제품은 기계에 적용이 가능하며, X-ray film과 똑같은 방법으로 사용이 가능합니다.
LAS 장비에서도 X-ray 감광 방법과 동일한 chemiluminescence detection 방법으로 프로그래밍을 해서 사용하신다면, 결과 확인에
문제없으실 겁니다.
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