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pLUG-Prime® TA-cloning Vector Kit II

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PRODUCT INFORMATION
Description

Fast ligation, High transformation efficiency가 가능한 pLUG-Prime® TA-Cloning Vector Kit II

  • • 5-15분 내외의 짧은 시간 안에 다양한 size의 insert DNA ligation 가능
  • • 높은 true white colony 비율
  • • Blue/white colony 선별 기능 제공
  • • Ampicillin resistant gene을 이용한 선택적 배양 가능
  • • 편리한 sequencing을 위한 M13 primer site 사용
  • • 활용도 높은 제한효소 적용
  • • EcoRI restriction enzyme site가 MCS (Multi cloning site) 양쪽에 있어 한 번에 enzyme cutting 가능

pLUG-Prime® TA-cloning Vector Kit II는 Fast ligation, High transformation efficiency의 특징을 가지고 있는 제품입니다.
특히 5-15분 내외의 짧은 시간 안에 ligation이 가능하도록 고안되어 있으며, 다양한 size의 insert DNA에서 높은 true white colony 비율을 나타내고 있습니다.
또한 ampicillin resistant gene을 이용하여 선택적인 배양이 가능하도록 하였으며, Blue/White colony 선별 기능으로 target transformants의 선별이 보다
용이합니다.

pLUG-Prime® TA-cloning Vector Kit II는 TA-cloning site에 보다 일반적이고 널리 알려진 restriction enzyme site를 갖도록 디자인 되어있으며,
특히 이전 제품에 비해 EcoRI restriction enzyme site가 양쪽에 있어 PCR product를 확인하는데 더욱 유용한 제품입니다.
이와 같은 방법을 통해 재조합 plasmid의 restriction analysis와 다른 vector로의 re-cloning을 용이하게 수행할 수 있게 해줍니다.

Applications
  • 01TA-cloning
  • 02Accepts terminal 3’-dA nucleotides overhang PCR products
  • 03Transform ligation product (purified/unpurified) into competent cells
  • 04LacZ complementation for blue/white screening
  • 05Ampicillin marker for antibiotic selection
Kit Contents
Content Concentration Volumes
TA-cloning Vector II (20 reactions) 25 ng/μl 40 μl × 1 vial
Control insert DNA 10 ng/μl 10 μl × 1 vial
T4 DNA ligase 2 U/μl 20 μl × 1 vial
Ligation Buffer A - 50 μl × 1 vial
Ligation Buffer B - 50 μl × 1 vial
Forward Primer (M13-F) 10 μM 50 μl × 1 vial
Reverse Primer (M13-R) 10 μM 50 μl × 1 vial
Manual 1 ea
Technical Data

Map & Multiple cloning site of the pLUG-Prime® TA-cloning vector Kit


 

Figure 1 : Map and sequence reference points of the pLUG-Prime® TA-Cloning Vector II
* Before the insert is incorporated into the pLUG-Prime® TA-Cloning Vector II, there is only one HindⅢ site and no BglⅡ site. After the incorporation, the T and A nucleotide on the insert will complement with the sequence on the vector and generate these two new sites.
This merit of pLUG-Prime® TA-Cloning Vector II makes cloning more economical and convenient.

 

 

Figure 2 : Multiple cloning site sequence of the pLUG-Prime® TA-Cloning Vector II

 

Figure 3. The gel analysis of the PCR products ligated by pLUG-Prime® TA-Cloning Vector Kit II

TroubleShooting Guide
Q매뉴얼을 보면 PCR products를 vector의 5-10배의 양을 사용하라고 되어 있는데, vector 1ul 당 몇 ng인가요?
AKit에 제공되는 vector의 농도는 25ng/ul입니다. 실험 1회 당 2ul를 사용하여 총 농도는 50ng이 됩니다.
더욱 자세한 PCR products의 사용양은 매뉴얼의 “Optimizing insert to vector ratio” 부분을 참고하시기 바랍니다.
QTransformation 후, colony의 개수 보다 blue colony의 비율이 더 높게 나타납니다.
ABlue colony가 나타나는 이유는 다양하지만 먼저 ligation을 할 때 모든 components를 제대로 넣었는지 확인하시기 바랍니다.
또 다른 경우로는 transformation 시 bacteria strain이 LacZ- (LacZ mutant strain)을 사용하는 경우입니다.
실험 전 strain phenotype를 확인하실 것을 권장합니다.
QInsert DNA로 사용할 PCR product의 크기가 4.5Kb가 됩니다. 이 정도 size의 PCR product도 ligation 시간을 15분 정도
실시해도 괜찮나요?
A본 제품은 Fast ligation이 가능한 제품으로 일반적인 크기의 insert DNA의 경우 ligation time을 5-15분 정도 실시하면 되지만
4.5Kb product와 같이 size가 큰 insert DNA는 ligation을 조금 더 오래 지속시키는 것이 좋습니다.
따라서 4.5Kb 정도의 큰 insert DNA를 사용한 실험에서 높은 효율의 실험 결과를 원하신다면 상온에서 8시간 이상 ligation 반응을
실시할 것을 권장해 드립니다.
QpLUG-Prime® TA-Cloning Vector Kit II로 cloning을 진행하고 sequencing을 하려고 하는데 sequencing primer는
어떤 것을 사용하면 되나요?
ApLUG-Prime ® TA vector II map을 보시면 알 수 있듯이, M13 primer를 사용하시면 됩니다.
QBlue/White colony selection이 가능한가요?
A네, 가능합니다. Vector의 map을 보시면 알 수 있듯이 당사의 제품도 LacZ를 기반으로 디자인 되었습니다.
Q제한효소 하나만을 이용하여 insert DNA를 얻고자 합니다. M13 primer를 사용하는 방법 외에 다른 방법은 없을까요?
A네, 가능합니다. 본 Vector의 map을 보시면 알 수 있듯이 EcoRI 제한효소가 MCS (multi cloning site) 양 끝에 존재합니다.
따라서 Eco RI 제한효소 하나만을 이용하여 vector와 insert DNA를 분리할 수 있습니다.
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