Description

높은 정확성을 요하는 gene cloning에 꼭 필요한 Proofreading 기능을 가지며 낮은 에러율을 보이는 고순도의 pfu DNA Polymerase가 포함되어 있는 Dried & aliquoted PreMix Kit

'pfu DNA Polymerase'의 Proof-reading 기능으로 낮은 에러율을 보이는 Dried & aliquoted PreMix Kit 높은 정확성을 요하는
gene cloning에 꼭 필요한 제품

• • Dried & aliquoted PreMix, All-in-one 제품
     - 반응에 필요한 모든 시약이 tube 하나에 dried pellet 상태로 되어있음
     - Template 및 primer만 첨가하여 바로 PCR 수행
     - Gel loading dye가 포함되어 있어 바로 전기영동 가능
• • 제품 안정성 및 재현성이 매우 우수함
     - ALHP system에 의한 dried & aliquoted PreMix로 재현성 우수
     - 진공압축제조공법에 의해 산화 및 수분방지로 안정성 우수
• • 높은 정확성
     - Proof-reading 활성이 있어 장편의 DNA template 증폭 가능
     - 유전자 cloning 및 발현과 같은 정확성을 요구하는 실험에 최적
• • 낮은 error rate
     - 3’→5’ exonuclease 활성이 있는 대표적인 내열성의 proof-reading 효소로서 1x10^-6의 error rate를 가짐
• • Blunt-end Cloning 가능

Maxime™ PCR PreMix Kit(i-pfu)는 i-pfu DNA Polymerase를 포함하여 PCR 반응에 필요한 모든 구성요소(dNTP Mixture, reaction buffer 등)가 ALHP system에 의해 각각의 PCR tube에 포함되어 dried pellet 상태로 되어 있기 때문에 실험자간의 pipetting에 오는 실험 오차를 현저히 줄일 수 있어 재현성이 매우 우수하며
진공압축제조공법에 의해 제품 내의 주요 구성 성분의 산화 및 수분방지로 인하여 활성 안정성이 매우 뛰어난 제품이라 할 수 있습니다.

또한, 본 제품은 template DNA, Primer set 그리고 D.W만 첨가하여 PCR을 할 수 있고, Gel loading buffer가 들어가 있어 다른 어떠한 처리 없이 gel loading을 할 수 있습니다. 본 제품에 사용된 i-pfu DNA Polymerase는 3’→5’ exonuclease 활성이 있는 대표적인 내열성의 Proof-reading 효소로서, 높은 fidelity를 가지고 있으며 1x10^-6(13,000 base pair 당 한 개의 error rate)의 낮은 error rate를 나타냅니다. pfu DNA Polymerase가 가지는 proof-reading 활성은 DNA Polymerase가 중합반응을 진행하는 중에 mismatched nucleotide가 끼어든 경우 이를 제거하고 상보적인 nucleotide로 교정할 수 있다는 것입니다. 이러한 활성은 Taq DNA Polymerase보다 더 정확한 염기서열의 PCR 산물을 얻을 수 있도록 하기도 하지만, Taq DNA Polymerase에 비하여 더 긴 DNA template를 증폭할 수 있도록 해줍니다. DNA 합성과정 중 DNA Polymerase가 template로부터 떨어져 나오게 되는 가장 큰 원인은 mismatched nucleotide가 중합반응을 방해하기 때문인데, pfu DNA Polymerase의 경우 이를 제거할 수 있기 때문에 중합반응을 계속할 수 있게 되며, 일반적인 Taq으로는 증폭이 어려운 긴 size의 PCR(up to ~ 30kb)에 적합한 효소로 일반 Taq DNA Polymerase에 비해 높은 fidelity와 proof reading 기능을 가지고 있습니다.
그 결과 Taq DNA Polymerase보다 더 긴 DNA fragment(최대 30kb)를 증폭할 수 있는 것입니다. 이런 특성 때문에 pfu DNA Polymerase가 중합효율이 떨어져 중합에 더 많은 시간을 필요로 함에도 불구하고 유전자 cloning 및 발현과 같이 정확성이 요구되는 실험에는 널리 이용되고 있습니다.

Maxime™ PCR PreMix Kit(i-pfu)는 위와 같은 i-pfu DNA Polymerase를 사용하여 높은 fidelity를 가지고 있으며 error rate가 낮으며 제품 안정성 및 재현성이 매우 우수할 뿐만 아니라 PCR 반응에 필요한 모든 구성요소가 하나의 tube에 dried pellet 상태로 되어 있어 여러 가지 sample에 대해 매우 빠르고 간단하게 실험하실 수 있는 제품입니다.

Applications

• 01General PCR
• 02염기서열 분석을 위한 template 증폭
• 03Blunt Cloning, etc.

Kit Contents

Technical Data

Maxime™ PCR PreMix Kit(i-pfu)의 민감도 확인을 위하여 자사 i-pfu DNA Polymerase와 비교 테스트를 진행하였습니다.
1 Kb(lamda DNA template) 및 4.5 Kb(5F’ plasmid DNA)를 증폭한 결과, 자사 i-pfu DNA Polymerase와 동일한 민감도를 보임을 확인할 수 있습니다.

[ 1 Kb ] Lane M, 1 Kb DNA Marker; lane 1, 200 pg DNA; lane 2, 20 pg DNA, lane 3, 2 pg DNA
[ 4.5 Kb ] Lane M, 1 Kb DNA Marker; lane 1, 50 ng DNA; lane 2, 10 ng DNA, lane 3, 2 ng DNA

Maxime™ PCR PreMix Kit(i-pfu)의 민감도 비교 실험을 위하여 타사 동일 기능의 제품과 비교 실험을 진행하였습니다.
4.5 Kb(5F’ plasmid DNA) 및 9 Kb(SLT plasmid DNA)를 증폭한 결과, 두 size 모두 타사 제품 대비 우수한 결과를 볼 수 있습니다.

[ 4.5 Kb ] Lane M, 1 Kb DNA Marker; lane 1, 200 ng DNA; lane 2, 100 ng DNA, lane 3, 50 ng DNA; lane 4, 25 ng DNA; lane 5, 12.5 ng DNA, lane 6, 6.25 ng DNA
[ 9 Kb ] Lane M, 1 Kb DNA Marker; lane 1, 250 ng DNA; lane 2, 50 ng DNA, lane 3, 10 ng DNA; lane 4, 2 ng DNA; lane 5, 400 pg DNA