i-pfu DNA Polymerase
높은 정확성을 요하는 gene cloning에 꼭 필요한 Proof-reading 기능을 가지며 낮은 에러율을 보이는 고순도의 pfu DNA Polymerase의
PCR core Kit
-6의 error rate를 가짐
i-pfu DNA Polymerase는 3’→5’ exonuclease 활성이 있는 대표적인 내열성의 Proof-reading 효소로서, 높은 fidelity를 가지고 있으며 1x10-6(13,000 base pair당 한 개의 error rate)의 error rate를 보장하는 제품입니다.
pfu DNA Polymerase가 가지는 proof-reading 활성은, DNA Polymerase가 중합반응을 진행하는 중에 mismatched(상보적이지 않은) nucleotide가 끼어든 경우 이를 제거하고 상보적인 nucleotide로 교정할 수 있다는 것입니다. 이러한 활성은 Taq DNA Polymerase
보다 더 정확한 염기서열의 PCR 산물을 얻을 수 있도록 하기도 하지만, Taq DNA Polymerase에 비하여 더 긴 DNA template를 증폭할 수 있도록 해줍니다.
DNA 합성과정 중 DNA Polymerase가 template로부터 떨어져 나오게 되는 가장 큰 원인이 mismatched nucleotide가 중합반응을 방해하기 때문인데, Pfu DNA Polymerase의 경우 이를 제거할 수 있기 때문에 중합반응을 계속할 수 있게 되며, 일반적인 Taq으로는 증폭이 어려운 긴 size 의 PCR(up to ~ 30 kb)에 적합한 효소로 일반 Taq DNA Polymerase에 비해 높은 fidelity와 proof reading 기능을 가지고 있습니다.
그 결과 Taq DNA Polymerase보다 더 긴 DNA fragment (최대 30kb)를 증폭할 수 있는 것입니다. 이런 특성 때문에 Pfu DNA Polymerase가 중합효율이 떨어져
중합에 더 많은 시간을 필요로 함에도 불구하고 유전자 cloning 및 발현과 같이 정확성이 요구되는 실험에는 널리 이용되고 있습니다.
이러한 i-pfu DNA Polymerase는 Taq DNA Polymerase와는 달리 blunt-end의 증폭산물을 만듭니다. 따라서 증폭산물을 클로닝하기 위해서는 blunt-end를 갖는 vector에 클로닝 할 수 있으며
T vector 클로닝 하기 위해서는 염기 A를 부가적으로 붙여 주어야 합니다.
| Content | 250 Units |
|---|---|
| i-pfu DNA Polymerase(2.5U/ul) | 250 units x 1 tube |
| 10× PCR Buffer(w/15 mM Mg2+) | 1 ml x 1 tube |
| 10× Mg2+ free PCR Buffer | 1 ml x 1 tube |
| 10 mM dNTPs (2.5 mM/each) | 500 ul x 1 tube |
| 25 mM Mg2+ | 1 ml x 1 tube |
| Manual | 1 ea |
참고. 10x i-pfu PCR Buffer
민감도 비교 test 결과(타사비교)
i-pfu DNA Polymeras와 Company A, B 사의 동일 기능의 제품을 이용하여 민감도를 비교하 기 위하여 1 Kb와 4.5 Kb fragment primer로 template 농도 별 희석하여 증폭한 결과입니다. i-pfu DNA Polymeras가 타사 동일 기능의 제품에 비하여 좀 더 낮은 template 농도에서도 뛰어난 민감도를 보여주고 있음을 볼 수 있습니다.
[ Panel A ] 1 Kb amplification(λDNA)
Lane M, 1 Kb DNA Ladder; lane 1, 200 pg λDNA; lane 2, 100 pg λDNA; lane 3, 50 pg λDNA; lane 4, 25 pg λDNA; lane 5, 12.5 pg λDNA; lane 6,
6.25 pg λDNA; lane 7, 3.125 pg λDNA; lane N, negative control
[ Panel B ] 4.5 Kb amplification(TopoXL/5F)
Lane M, 1 Kb DNA Ladder; lane 1, 50 ng DNA; lane 2, 10 ng DNA; lane 3, 2 ng DNA; lane 4, 400 fg DNA; lane 5, 80 fg DNA; lane 6, 16 fg DNA;
lane 7, 3.2 fg DNA; lane N, negative control
-6이며, 최대 10kb까지 증폭이 가능합니다. 더 높은 기능이 함유된 제품을 원하신다면, error rate이 1.8X10-8이고 20kb까지 합성 가능한 i-StarMAXII™ 제품을 추천 드립니다.
| 상품명 | Cat.No | 용량 | 가격 | ||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Maxime™ PCR PreMix (i-pfu) |
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| dNTP Mixture (2.5mM) |
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| Muta-Direct™ Site Directed Mutagenesis Kit |
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