Description

비특이 증폭을 줄이는 hot-start 기능이 있는 높은 특이도를 보이는 i-StarTaq™ PCR core Kit

• • Hot-start 기능을 가진 높은 특이성 및 정확성을 보임
• • 고순도의 Hot-start Taq DNA Polymerase
• • 재현성 높은 결과 도출 가능
• • 일반적인 PCR, RT-PCR, multiplex PCR과 PCR로 인한 DNA 감별(VNTR, STR, RAPD)에 적용 가능
• • 클로닝 된 DNA에서 인체 genomic DNA에 이르기까지 다양한 DNA에 적용 가능

i-StarTaq™ DNA Polymerase는 antibody 방식이 아닌 chemical 방식의 Hot-start 기능의 효소로서, 비특이 증폭을 줄이고 특이성 및 정확성을 높인 제품입니다.
따라서 비특이 band나 primer dimer 같은 비특이 증폭으로 특이 band가 약하게 증폭될 때 해결책으로 사용할 수 있습니다. Taq DNA Polymerase가 PCR에서 가장 일반적으로 사용되고 있지만 증폭하고자 하는 대상이 다양해짐에 따라 일부 PCR 조건에서는 Taq DNA Ppolymerase가 적합치 않습니다. PCR에서 가장 많이 접하게
되는 문제는 비특이 band가 함께 증폭되거나 특이 band 증폭이 현저히 낮거나 실패하는 경우로서 주로 특이성이 낮은 데 원인이 있습니다. Forward 또는 reverse primer 어느 하나가 특이성이 떨어진다거나 두 primer가 primer dimer를 만들려는 경향이 강한 경우 이러한 현상이 나타나는데, 이는 Taq DNA Polymerase가 보통 PCR 반응용액을 준비하는 상온에서도 활성을 나타내기 때문입니다.

Hot-start PCR법은 이러한 문제를 극복하기 위해 고안된 방법으로 Taq DNA Polymerase가 primer의 annealing temperature 이하에서는 작용하지 못하도록 물리화학적으로 막는 방법입니다. 고전적으로는 94℃로 가열된 PCR 반응용액에 Taq DNA Polymerase를 넣어 반응을 시작하거나 wax를 이용하여 반응용액과 Taq DNA Polymerase를 물리적으로 격리하는 물리적인 방법을 사용하였습니다. 현재는 특이 항체를 이용하거나 또는 화학적으로 Taq DNA Polymerase를 가역적으로 비활성화 하는 방법 등으로 hot-start PCR을 하고 있습니다. i-StarTaq™ DNA Polymerase는 앞서 언급한 바와 같이, 화학적 방식으로 hot-start PCR을 구현하였으며 이를 통하여 일반적인 PCR 및 RT-PCR과 더불어 Multiplex PCR 및 질병진단 연구에 최적의 제품이라 할 수 있습니다.

Applications

• 01Pathogen detection
• 02Genomic DNA PCR
• 03Hot-start PCR
• 04Real-time PCR
• 05High GC rich, repeat region PCR
• 06T/A vector cloning
• 07LOH or MSI analysis related PCR, etc.

Kit Contents

Technical Data

i-StarTaq™ DNA Polymerase와 Company A, B사의 Hot-start DNA Polymerase를 이용하여 Multiplex primer(fyuA(780bp), tsh(420bp), Irp2(280bp)) primer 로 template 농도 별 희석하여 민감도를 비교 하였습니다. 결과에서 볼 수 있듯이, i-StarTaq™ DNA Polymerase 가 낮은 template 농도에서 뛰어난 민감도를 보여주고 있음을 알 수 있습니다.

Lane M, 100 bp DNA Marker; lane 1, Negative control; lane 2, 100 ng gDNA, Lane 3, 50 ng gDNA; lane 4, 25 ng gDNA; lane 5, 12.5 ng gDNA; la ne 6, 6.25 ng gDNA; lane 7, 3.125 ng gDNA; lane 8, 1.5625 ng gDNA