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DNA

MEGAquick-spin™ Plus Total Fragment DNA Purification Kit

Cat.No 용량 주문수량 판매가
17290 200 col. up down 220,000원
PRODUCT INFORMATION
제품 개요 | Description

MEGAquick-spin Plus™ Total Fragment DNA Purification Kit는 65bp ~ 20kb의 DNA 단편과 agarose gel의 PCR 증폭 산물들의 효소 반응 산물을 정제하고 clean up 하기 위한 제품입니다.
최대 99%의 PCR purification성능을 확인하였으며, 뉴클레오티드와 primer dimer를 효과적으로 제거하는 제품입니다.
본 제품을 통해 정제된 DNA는 시퀀싱, 클로닝, 제한효소 처리 등에 사용하기에 적합합니다.

Principle

• 65bp 에서 20kb 까지 다양한 크기의 PCR purification 및 Gel extraction 가능

• Primer dimer 제거 등 정제 성능이 우수하며 고순도의 DNA 절편 정제 가능

• 실험 소요 시간이 짧고 하나의 키트로 PCR purification 및 Gel extraction 모두 수행 가능

제품 용도 | Intended Use

• PCR purification 및 Gel extraction

• Primer dimer 등 효소 반응의 부산물 처리 및 DNA 농축

• DNA 시퀀싱, 클로닝, 제한효소 처리를 위한 시료 준비

제품 구성 | Kit Contents
번호 구성물 Unit
1 BNL Buffer 160 ml x 1 bottle
2 Washing Buffer 45 ml x 1 bottle
3 Elution Buffer 20 ml x 1 bottle
4 Spin Column / Collection Tube 200 ea
제품 성능 | Technical Data

1. The DNA recovery rate of the various sizes of DNA fragment

• 정제 전, 후 산물의 DNA 회수율을 비교한 결과, 89bp ~ 20kb size의 증폭 산물에 대해 PCR purification 91 ~ 99%(좌) / Gel extraction 68 ~ 88%(우) 회수율을 확인하였습니다 (Figure 1_정제전 Blue color - 정제후 Orange color).

 

 

 

Figure 1. The Graph of the DNA recovery rate of the PCR purification and gel extraction. Blue bar graph : Before purification, Orange bar graph : PCR purification and Gel extraction products.
 

 

 

2. Effectiveness of purification from high-concentrated gel & dimer removal

• 89bp의 DNA 단편 시료를 사용하여 gel 농도에 대한 정제 성능을 확인한 결과, 회수율은 각 농도별 72% / 61% / 56%로 4% 이상 gel에서도 50% 이상의 회수율로 정제가 가능합니다(Figure 2).

• PCR 증폭 산물을 정제 후 전기영동으로 확인한 결과, 89bp ~ 9kb size의 모든 산물에서 dimer가 효과적으로 제거됩니다(Figure 3). 

 


Figure 2(Left). Agarose gel electrophoresis of gel extraction products with gel. Concentration. M : DNA marker, Lane 1 : Before gel extraction, Lane 2 : 1.5% agarose gel, Lane 3 : 4% agarose gel, Lane 4 : 5% agarose gel.

Figure 3(Right). Agarose gel electrophoresis of PCR purification. M : DNA marker, Lane 1,6 : 89bp, Lane 2,7 : 280bp, Lane 3,8 : 1kb, Lane 4,9 : 4.5kb, Lane 5,10 : 9kb ​ 

 

 

 

3. Comparative test with other company

 

• PCR Purification _ 2.7kb의 DNA 단편 PCR 증폭 산물 대상 비교시험 결과, 본 제품의 회수율과 primer dimer 제거 성능이 가장 우수한 것을 확인하였습니다(Figure 4).

• Gel Extraction _ 2.7kb의 DNA 단편 대상 비교시험 결과, 본 제품의 Agarose gel 회수율이 가장 높은 것을 확인하였습니다(Figure 5). 




Figure 4(Left). Results of comparative experiments with other suppliers. Lane M : DNA marker, Lane 1 : Before purification, Lane 2 : Previous version, Lane 3 : MEGAquick-spin kit, Lane 4 : Supplier Q, Lane 5 : Supplier G.

Figure 5(Right). Results of comparative experiments with other suppliers. Lane M : DNA marker, Lane 1 : Previous version, Lane 2 : MEGAquick-spin kit, Lane 3 : Supplier Q, Lane 4 : Supplier G.




4. Spin-column binding capacity & stability of DNA

  

• 시료 DNA를 5 ~ 600 ng/ul 농도로 100ul씩 투입 후 회수율을 측정한 결과, 최대 45ug의 DNA를 수용 가능한 것으로 확인(좌, graph).

• 정제 후 DNA의 보존 성능을 확인 결과, endonuclease 영향 없이 안정적임을 확인(우, figure). 

TroubleShooting Guide
QDNA Fragment 정제 시 회수율이 낮습니다.
ADNA Fragment의 크기가 작은 경우 (200bp 이하) BNL 버퍼 투입 전, 샘플과 동일한 volume의 isopropanol을 첨가하면 회수율을 높일 수 있습니다.
DNA Fragment의 크기가 5kb 이상인 경우 원심분리 전에 Elution 버퍼를 60℃로 incubation 후 사용하실 경우 회수율을 높일 수 있습니다.
QGel extraction 실험 시 column에 잔여물이 남아있습니다.
AGel이 완전히 녹지 않을 경우, column에 잔여물이 남고 회수율이 떨어지게 됩니다. 추출시 사용하는 gel의 양을 300mg가 넘지 않도록 하며, gel의 농도가 높은 경우(>2%) BNL 버퍼를 1000uL 투입하고, 완전히 녹을 때까지 충분히 lysis를 진행합니다.
Q전기 영동 시 원하지 않는 밴드가 보입니다.
AGel extraction 실험 시, 칼날이 오염되어 원하지 않는 밴드가 보이는 경우가 있습니다. 알코올 등으로 충분히 소독하거나 새 칼날을 이용해 gel을 자르는 것을 권고 드립니다. 또한 충분한 시간 동안 전기영동을 통해 원하는 밴드가 완전히 분리된 후 gel extraction을 진행하십시오.
Q제품에 포함된 Washing 버퍼가 용기에 비해 양이 적어요.
A본 제품의 Washing 버퍼는 에탄올이 함유되지 않은 채 공급되며 bottle에 기입된 투입량에 맞게 100%의 에탄올을 투입하여 사용하시면 됩니다.
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