e-Myco™ VALiD Mycoplasma PCR Detection Kit
Mycoplasma 부정시험의 직접법을 대체할 수 있는 신속하고 간편한 PCR 검출 키트
Mycoplasma는 세포벽이 없는 비정형의 세균으로서 항생제 혹은 막 여과를 통한 제어가 어렵기 때문에 세포 배양 등에 있어 중요한 오염원으로 인식되고 있습니다. 실제 30% 이상 (최대 85%까지)의 배양 세포가 이미 Mycoplasma에 오염되어 있는 것으로 알려져 있는데, Mycoplasma에 의해 오염된 세포는 사멸되지 않고 세포주의 특성 혹은 대사 등에 변화를 유발하기 때문에 사용자는 자신의 세포주가 오염되어 있는지 모른 채 세포를 취급함으로써 잘못된 연구 결과를 도출할 위험에 노출되어 있습니다.
또한, 생명공학 기술의 발전에 따라 (체내에 직접 주입되는) 다수의 세포 기반의 의약품이 상용화되고 있으므로 Mycoplasma 오염의 모니터링이 매우 중요한 공정 중
하나로 인식되고 있습니다.
본 제품은 conventional PCR 기반의 제품으로서 Mycoplasma에 특이적인 16S rRNA 서열을 target으로 하여 배양 세포 등에 혼입된Mycoplasma를 정성검사 할 수 있는 제품입니다. 특히 각국의 의약품 규제관리기관이 제시하는 Mycoplasma PCR 부정시험의 각 항목을 실증하여 검증한 제품으로써 주요 Mycoplasma를 10CFU/ml의 민감도로 검출할 수 있으며, Mycoplasma와 근연관계에 있는 Clostridium spp. Streptococcus spp. Lactobacillus spp. 및
기타 미생물의 genomic DNA 등과 교차 반응하지 않는 높은 특이도를 갖고 있습니다.
기존의 직접 배양의 경우 높은 민감도를 갖고 있으나 배양에 3주 이상의 긴 시일이 소요되거나, 배양 자체가 어려운 경우도 많았지만 본 제품을 활용할 경우 3~4시간 이내 높은 민감도와 특이도의 검출이 가능하므로 세포 기반 의약품 생산의 전/중/후공정
검사에 활용할 수 있으며, 넓은 검출 Spectrum을 갖고 있으므로 세포주 관리 시 Mycoplasma 오염의 모니터링 용도로 사용할 수 있습니다.
본 제품은 하나의 Tube 내에 Mycoplasma PCR 검출을 위한 모든 contents를 함유하고 있으며 PCR 반응의 유효성을 모니터링하는 internal control까지 포함되어
있으므로 사용자는 검체의 DNA와 증류수만 첨가하면 되므로 사용의 편의성이 극대화된 제품이며 짧은 handling 과정이 특징적이기 때문에 실험자 간의 결과 편차가 없고 복잡한 실험과정 중 일어날 수 있는 오염 또한 최소화된 제품입니다.
본 제품은 미국, 유럽, 일본 등의 국･내외 Mycoplasma 부정시험 관련 가이드라인에 근거로 하여 개발된 제품으로서 높은 민감도, 특이도 및 사용 편의성이 특징적이며 기존의 직접배양법에 대한 현실적인 대안이 될 수 있는 제품입니다.
| Contents | 25239 |
|---|---|
| e-Myco™ VALiD Mycoplasma PCR Premix | 48 tubes |
| DNase/RNase-free Water | 1 ml |
| Control DNA | 25 μl x 3T |
| Manual | 1 ea |
높은 특이도
본 제품의 Mycoplasma에 대한 검출 특이도를 확인하기 위해 Mycoplasma 이외의 6종의 세균 DNA와 양성 대조구 M. hyorhinis에 대하여 증폭을 실시하였습니다. M. hyorhinis에서는 target band와 internal control band가 함께 증폭되었으며, 6종의 세균 DNA 및 no template control에서는 internal control 만이 증폭되는 것을 확인할 수 있었습니다. 이를 통해 e-Myco™ VALiD Mycoplasma PCR Detection Kit은 Mycoplasma에 특이적으로 반응하여 검출할 수 있음을 확인하였습니다.
Fig. Specificity of e-Myco™ VALiD Mycoplasma PCR Detection Kit
LaneM, SiZer™-100 DNA Marker; Lane 1, Mycoplasma hyorhinis; Lane 2, Clostridium perfringens; Lane 3, Streptococcus mutans; Lane 4, Lactobacillus plantarum; Lane 5, Mobiluncus mulieris; Lane 6, Gardnerella vaginalis Lane 7,Haemophilus ducreyi; Lane N, No template control.
직접법을 대체 가능한 높은 검출한계
e-Myco™VALiD Mycoplasma PCR Detection Kit은 6종의 Mycoplasma에 대해 모두 검출 가능함을 확인할 수 있으며 각각의 Mycoplasma DNA의 10CFU/ml에 해당되는 농도까지에서 검출이 이루어짐을 확인하였습니다. 이를 통하여 기존의 부정시험 방법인 직접법을 대체할 수준의 민감도를 갖는 PCR 검사법으로 활용할 수 있음을 확인할 수 있었습니다.
Fig. Analytical Sensitivity of e-Myco™ VALiD Mycoplasma PCR Detection Kit
LaneM, SiZer™-100 DNA Marker; Lane 1, 1×106 cfu/ml of gDNA; Lane 2, 1×105 cfu/ml of gDNA; Lane 3, 1×104 cfu/ml of gDNA; Lane 4, 1×103 cfu/ml of gDNA; Lane 5, 1×102 cfu/ml of gDNA; Lane 6, 10 cfu/ml of gDNA; Lane 7, 1 cfu/ml of gDNA; Lane N, No template control.
직접법과의 비교 시험
직접법과 본 제품의 민감도 비교시험을 실시하였습니다. 초기 미지 농도의 배양액을 사용하여 직접 배양을 통해 Mycoplasma를 검출하였을 때 최대 1/109 농도로 희석 한 시료에서 1~2개의 colony가 관찰되었습니다. 이를 본 제품에 적용하였을 때 직접법에서 확인한 최대 1/109 농도에서 Target band가 검출되는 것을 확인할 수 있었습니다. 이를 통해 본 제품을 활용한 PCR 부정시험이 직접법을 효과적으로 대체 할 수 있음을 확인할 수 있었습니다
Fig. Comparative test of e-Myco™ VALiD Mycoplasma PCR Detection Kit with direct plating method.
LaneM, SiZer™-100 DNA Marker; Lane 1, 10-3 diluted A. laidlawii; Lane 2, 10-4 diluted A. laidlawii; Lane 3, 10-5 diluted A. laidlawii; Lane 4, 10-6 diluted A. laidlawii; Lane 5, 10-7 diluted A. laidlawii; Lane 6, 10-8 diluted of A. laidlawii; Lane 7, 10-9 diluted A. laidlawii; Lane N, No template control
| 상품명 | Cat.No | 용량 | 가격 | ||||
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| SiZer™-100 DNA Marker Solution |
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| SiZer™-1,000 plus DNA Marker Solution |
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